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pcr聚合酶链式反应步骤

pcr聚合酶链式反应不是一步到位的,那么pcr聚合酶链式反应步骤是什么呢?

实验器具与材料:移液枪:200ul、10ul;吸头:200ul、20ul;吸头台:放置200ul和20ul的吸头一个;EP管1.5ml、100ul;塑料制品:(包括吸头、EP管等)送至高压3次,试验前将枪头放入吸头台。双蒸水100ml盐水瓶内装40ml蒸馏水,送至高压,后分装到几个1。5mlEP管中,-20℃中保存备用。

然后准备100ul EP管,依次在管中加入50ul反应体系),稍离心,100℃沸水浴1分钟,趁热加入Tag酶0.5ul(冰上操作),再加入50ul液体石蜡封闭,10000rmp离心1分钟,进行40个循环,然后72℃10min 完后4℃保温。10000rmp离心5min,将下层水相转入新的0.65mlEP管中,-20℃保存。

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pcr聚合酶链式反应的原理和操作

聚合酶链式反应有pcr的方面,那么pcr聚合酶链式反应的原理和操作是什么呢?

pcr聚合酶链式反应的原理和操作:将聚合酶链式反应反应体系升温至95℃左右,双链的DNA模板就解开成两条单链,此过程为变性。然后将温度降至引物的Km值以下,3端与5端的引物各自与两条单链DNA模板的互补区域结合,此过程称为退火。当将反应体系的温度升至70℃左右时,耐热的Taq DNA聚合酶催化四种脱氧核糖核苷酸按照模板DNA的核苷酸序列的互补方式依次加至引物的3端,形成新生的DNA链。

每一次循环使反应体系中的DNA分子数增加约一倍。理论上循环几次,就增加为2^n倍。当经30次循环后,DNA产量达2^30拷贝,约为10^9个拷贝。由于实际上扩增效率达不到2倍,因而应为(1+R)^n,R为扩增效率。

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pcr聚合酶链式反应有哪些

某些领域需要pcr聚合酶链式反应的,那么pcr聚合酶链式反应有哪些呢?

pcr聚合酶链式反应有模板核酸。用于聚合酶链式反应的模板核酸可以是DNA,也可以是RNA。当用RNA作模板时,首先要进行反转录生成cDNA,然后再进行正常的聚合酶链式反应循环。核酸模板来源广泛,可以从培养细胞、细菌、病毒、组织、病理标本、考古标本等中提取。

pcr聚合酶链式反应还有引物。引物决定聚合酶链式反应扩增产物的特异性与长度。因此,引物设计决定聚合酶链式反应的成败。

pcr聚合酶链式反应还有耐热的TaqDNA聚合酶。1976年Chien分离出热稳定聚合酶,1986年Erlich分离并纯化了适于聚合酶链式反应的Tq热稳定性聚合酶,为聚合酶链式反应成为实用技术奠定了基础,现已用基因重组生产。

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pcr聚合酶链式反应名词解释

pcr聚合酶链式反应看情况用的,对于pcr聚合酶链式反应名词解释是什么呢?

pcr聚合酶链式反应又称体外基因放大技术,是用DNA聚合酶在体外系统中诱发一对引物间的DNA双链的合成过程。经过20~30次循环后,可使目的基因片段成百万倍地扩增,使得对该基因片段的分析研究更为便利。PCR技术自1985年创立以来,经过不断改进,目前已成为分子生物学研究的重要手段。PCR技术已经应用于遗传病的基因诊断和产前诊断,病原体的鉴定,癌基因的分析研究等。最突出的是经PCR放大后的DNA片段可以直接进行顺序分析。

本身DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链,在DNA聚合酶的参与下,根据碱基互补配对复制成同样的两分子拷贝。在实验中发现,DNA在高高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,加入设计引物,DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。

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