聚合酶链式反应的原理是什么
收藏聚合酶链式反应灵敏度是比较高的,那么聚合酶链式反应的原理是什么呢?
聚合酶链式反应的原理是双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链,在DNA聚合酶的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。但是,DNA聚合酶在高温时会失活,因此,每次循环都得加入新的DNA聚合酶,不仅操作烦琐,而且价格昂贵,制约了PCR技术的应用和发展。耐热DNA聚合酶-Taq酶的发现对于PCR的应用有里程碑的意义,该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本,PCR技术得以大量应用,并逐步应用于临床。
聚合酶链式反应的延伸温度一般为72℃左右,此时Taq酶活性为每秒钟掺入核苷酸35-100个,2kb的片段用1min已足够,若DNA片段较长,扩增时间可适当延长。聚合酶链式反应延伸时间过长又可引起非特异性扩增。
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